類器官基因編輯科研服務

項目介紹

體外培養為基因編輯應用提供了高通量的實驗可能性，并且更容易操作。重要的是，基因編輯能夠進行可操控的設置：通過調節培養基組分中的信號分子來引入和選擇精確的突變?；蚓庉嫾毎捏w外培養，能夠篩選出所需突變的克隆，并將其擴增為細胞系，這在動物模型中是不可能實現的。

服務流程

文獻案例

1.    2022年6月Gastric Cancer上發表，利用基本編輯技術，敲除了正常胃癌類器官的CDH1基因，構建了e-鈣粘蛋白敏感的人胃類器官模型，發現敲除后的腫瘤類器官與SRCC的細胞形態和細胞活力類似。

2.    2020年3月，Nature Cell Biology雜志上發表文章，利用非同源依賴的CRISR-Cas9技術快速高效地對人源類器官進行基因敲入（CRISPR–HOT)，為人源類器官的內源基因敲入提供了重要的工具平臺。通過讓癌基因TP53失去功能，發現異常肝細胞的非結構化分裂更為頻繁。使用CRISPR-HOT將熒光標記插入人類類器官的DNA中，建立了人肝臟導管類器官的報告基因品系，可以利用活體成像、切片染色等方式可視化觀察內源表達的基因表達模式以及動態變化過程。

參考文獻：

[1]Yamaguchi K , Yoshihiro T , Ariyama H ,et al.Potential therapeutic targets discovery by transcriptome analysis of an in vitro human gastric signet ring carcinoma model[J].Gastric Cancer, 2022, 25(5):862-878.

[2]Artegiani B, Hendriks D, Beumer J, et al. Fast and efficient generation of knock-in human organoids using homology-independent CRISPR-Cas9 precision genome editing. Nat Cell Biol. 2020;22(3):321-331.

常見問題

1.    類器官的形態在培養過程中發生變化的原因有哪些？

在常規的培養條件下，形態應當保持一致。

培養物形態變化可能反映出培養條件的問題：

?   ECM：確保使用了特定模型的ECM，并且稀釋至正確的終濃度。

?   培養基：確保使用正確的培養基配方，且保存條件適當。確保緩沖液更換頻率和體積正常。培養密度：多次傳代或放大培養規模時，類器官的密度要保持一致。

?   傳代頻率：按照一致的傳代時間表來維持類器官。